كيف يتم تشخيص الفيروسات؟ - زراعة الفيروس في جنين بيض الدجاج.. استخدام أم العائل الطبيعي أو أحد الحيوانات المعملية الملائمة لزراعة الفيروسات

تشخيص الفيروسات - زراعة الفيروس في جنين بيض الدجاج

Virus Culture in Embryonating Chicken Egg

الفيروسات كائنات متطفلة إجباريا داخل العائل الخاص بها، ولقد كانت الطرق الأولى لتنمية الفيروسات المسببة للمرض للحيوان لأغراض الدراسة، تستخدم أم العائل الطبيعي أو أحد الحيوانات المعملية الملائمة لزراعة الفيروسات.

زراعة فيروسات الحيوان:

ولقد أظهرت الدراسات فيما بعد بخصوص زراعة فيروسات الحيوان أن الجنين الدجاج النامي Developed chick embryo يمكن استخدامه لزراعة كثير من الفيروسات.

ولما كانت الزراعة فى جنين الطيور أكثر اقتصادية من الزراعة فى حيوانات التجارب، فقد إستخدمت عادةً فى عزل وتعريف وتقدير أعداد، وحفظ كثير من الفيروسات الحيوانية، وأيضا فى إعداد اللقاحات المضادة لها.

وفي هذا التدريب سوف نشاهد على أجنة الدجاج chick embryos نمو فيروس مثل فيروس مرض النيوكاسل New Castle disease virus الذى يصيب الدجاج أو أى مرض فيروسي أخر متوفر لديك فى المعمل.

الأهداف:

1- التعرف على طريقة تنمية الفيروسات المسببة للأمراض بإستخدام بيض الدجاج الملقح.
2- عزل وتعريف مرض فيروسى يصيب الحيوانات بإستخدام طريقة بيض الدجاج الملقح.
3- التعرف على طريقة زراعة الفيروس فى جنين بيض الدجاج كطريقة لحفظ كثير من الفيروسات التى تصيب الحيوان والإنسان.

مخرجات التعلم:

نتوقع من الطالب المعلم بعد تنفيذ هذا العملى أن يكون قادراً على أن:
1- زراعة الفيروسات فى جنين بيض الدجاج (البيض الملقح)
2- يميز بين البيض المصاب بالفيروس والبيض السليم.
3- يدرك أن الفيروسات يمكن عزلها وتشخيصها بواسطة بيض الطيور الملقحة (التي تحتوى على جنين).
4- يدرك أن زراعة وتشخيص الفيروسات بواسطة بيض الطيور الملقحة أكثر اقتصادية وسهولةً من الزراعة فى حيوانات التجارب.

السلامة والأمان:

بإضافة الى إحتياطات الأمان والسلامة المذكورة فى بداية الدليل، على الطالب والمشرف على العملى والفنى أن ينتبهوا لبعض الأحتياطات السلامة الخاصة بهذا العملى ومنها:

1- يجب التأكد من عدم إختيار فيروسات مرضية تصيب الإنسان  بأمراض خطيره عند حقن بيض الدجاج الملقح.

2- التخلص من بيض الدجاج المحقونه بالفيروسات بتعقيمها بجهاز الأوتكلاف أو حرقها قبل رميها فى صناديق أو أكياس المخلفات فى المعمل.

3- الحرص فى إستخدام أبر الحقن بحيث تكون معقمه Sterile syringes والتخلص منها بعد الإستخدام بعد تعقيمها.

4- إغسل جيداً بالماء والصابون بعد هذه التجربة ويفضل إستخدام مطهر لليدين، لاتلمس عينيك حيث أن فيروس النيوكاسل يمكنه أن يسبب إلتهاباً لملتحمة العين (Conjunctivitis) فى الإنسان.

الأدوات والمواد الأزمة:

1- بيض دجاج ملقح (يحتوى على جنين 10 أيام).
2- ضوء كهربائى (شمعة كهربائية).
3- محلول اليود.
4- كحول.
5- أبرة حقن.
6- محلول ملحى معقم (كلوريد الصوديوم 0.9 %).
7- حضانة (37ºم).

خطوات التجربة:

1- ضع بيضتين محتويتين على أجنة فى مواجهة الضوء بإستخدام الشمعة الكهربائية، بحيث يكون محوراهما الطوليان أفقياً، ثم حدد وضع علامة على موضع الغرفة الهوائية للبيضة.

2- عقم قشرة البيضة فى منطقة الغرفة الهوائية، وذلك بمسح المنطقة المعلمة بمحلول اليود مع الكحول الذى أمامك.

3- عقم إبرة مقاس 18 بغمسها فى محلول قاتل للميكروبات ثم تعرضها للهب (أو أستخدم أبرة معقمة) وإستخدمها فى ثقب قشرة بيضة واحدة فى أعلى نقطة من الغرفة الهوائية.

تحذير:

إحرص على عدم ثقب الغشاء الموجود عند قاعدة الغرفة الهوائية.

4- بإستخدام حقنة سعة 1 مل وبإستخدام إبرة مقاس 27 (2 سم) لقح التجويف الأنتيوزى (Allantoic cavity) بمعلق فيروس النيوكاسل المخفف الذى أمامك، وذلك بإدخال الإبرة عمودية من خلال ثقب القشرة، ثم إدخال كل طول الأبرة موازية للمحور الطولى للبيضة، ثم أحقن 0.2 مل المستحضر الفيروسى، ثم إسحب الإبرة وإغلق الثقب بإستخدام مادة لاصقة أو شمع البرافين.

5- كمقارنة (Control) أحقن البيضة المخصبة الثانية بواسطة 0.2 مل محلول ملحى معقم مستخدماً نفس الخطوات السابقة 1،2،3،4 ثم اغلق الثقب أيضاً بمادة الأصقة أو شمع البرافين.

6- حضن البيض على درجة 37ºم فى محضن يحتوى على صوان بها ماء للمحافظة على رطوبة الجو المناسبة داخل المحضن.

7- أفحص البيض الملقح تحت الضوء بواسطة الشمعة الكهربائية فى الدرس العملى التالى وذلك بالنسبة لموت الجنين، والذى يمكن التأكد منه بتوقف الحركة أو إختفاء العروق من قشرة البيض. ويسبب فيروس النيوكاسل موت الجنين خلال 3، أو 4 أيام بعد التلقيح. وإذا تأكدت من موت الجنين أكسر قشرة البيضة وقم بتفريغ محتوياتها فى طبق بترى أخر.

- قارن شكل الجنين فى الحالتين: لاحظ وجود أى علامات شاذة على جنين البيضة الملقحة مثل إصابات ووجود بقع ميتة، ووجود نزيف دموى.

ملحوظة:

إذا حدث الموت خلال 24 ساعة من التلقيح، فمعنى هذا أنه حدث بسبب إصابة بكتيرية وليس بسبب فيروس مرض النيوكاسل).