الصباغة التفريقية (صبغة جرام): دليل شامل
تُعد صبغة جرام من أهم وأكثر الصبغات استخدامًا في علم الأحياء الدقيقة، حيث تُساعد على تصنيف البكتيريا إلى مجموعتين رئيسيتين: موجبة الجرام وسالبة الجرام. يعتمد هذا التصنيف على الاختلافات في تركيب الجدار الخلوي للبكتيريا.
المواد والأدوات اللازمة:
- محلول الكريستال البنفسجي (Crystal violet)
- محلول اليود (Gram's iodine)
- كحول إيثيلي 95% (Decolorizer)
- محلول الصفرانين (Safranin)
- زجاجة غسيل بها ماء مقطر
- شرائح زجاجية نظيفة
- لهب بنزن
- إبر تلقيح (Inoculating loop)
- مزارع بكتيرية مختلفة
- بكتيريا كروية موجبة لصبغة جرام (Staphylococcus aureus)
- بكتيريا عصوية سالبة لصبغة جرام (Escherichia coli)
- بكتيريا عصوية موجبة لصبغة جرام (Bacillus subtilis)
خطوات العمل:
- تحضير الغشاء البكتيري:
- باستخدام إبرة التلقيح، خذ عينة من المزرعة البكتيرية (سائلة أو نامية على بيئة صلبة).
- ضع العينة على شريحة زجاجية نظيفة.
- انشر العينة على الشريحة لتكوين طبقة رقيقة.
- التثبيت:
- مرر الشريحة بسرعة خلال لهب بنزن لتثبيت البكتيريا على الشريحة.
- تجنب تعريض الشريحة للحرارة الشديدة.
- الصبغة الأولى (الكريستال البنفسجي):
- غطِ الغشاء البكتيري بمحلول الكريستال البنفسجي لمدة دقيقة واحدة.
- اغسل الشريحة برفق بالماء المقطر.
- المثبت (اليود):
- غطِ الغشاء بمحلول اليود لمدة دقيقة واحدة.
- اغسل الشريحة بالماء المقطر.
- إزالة اللون (الكحول):
- أضف الكحول الإيثيلي 95% قطرة قطرة على الغشاء.
- استمر في إضافة الكحول حتى يبدأ اللون البنفسجي في الزوال.
- اغسل الشريحة بالماء المقطر على الفور لإيقاف عملية إزالة اللون.
- الصبغة الثانية (الصفرانين):
- غطِ الغشاء بمحلول الصفرانين لمدة 30 ثانية.
- اغسل الشريحة برفق بالماء المقطر.
- التجفيف والفحص:
- جفف الشريحة باستخدام ورق ترشيح.
- افحص الشريحة تحت المجهر باستخدام العدسة الزيتية.
النتائج:
- البكتيريا موجبة الجرام: تظهر باللون البنفسجي أو الأزرق الداكن لأنها تحتفظ بالصبغة الأولى (الكريستال البنفسجي) بعد إزالة اللون بالكحول.
- البكتيريا سالبة الجرام: تظهر باللون الأحمر أو الوردي لأنها تفقد الصبغة الأولى أثناء إزالة اللون وتُصبغ بالصبغة الثانية (الصفرانين).
ملاحظات هامة:
- يجب أن تكون الشرائح الزجاجية نظيفة تمامًا وخالية من الدهون.
- يجب تثبيت الغشاء البكتيري بشكل صحيح لضمان عدم فقدانه أثناء الصباغة.
- يجب التحكم في وقت إزالة اللون بالكحول بعناية للحصول على نتائج دقيقة.
- يجب استخدام مزارع بكتيرية نقية للحصول على نتائج موثوقة.
أهمية صبغة جرام:
- تُستخدم في تصنيف البكتيريا وتحديد نوعها.
- تُساعد في اختيار العلاج المناسب للعدوى البكتيرية.
- تُستخدم في الأبحاث والدراسات العلمية المتعلقة بالبكتيريا.
التسميات
بكتيريا وفيروسات