ما هي الصباغة البسيطة؟.. بكتيريا كروية موجبة لصبغة جرام عنقودية. بكتيريا عصوية موجبة لصبغة جرام. محلول أزرق الميثيلين

الصباغة البسيطة Simple Staining

الأدوات والمواد اللازمة:

1- محلول أزرق الميثيلين.
2- زجاجة غسيل بها ماء مقطر.

3- شرائح زجاجية نظيفة.
4- لهب بنزن.
5- إبر الحقن.

6- مزارع بكتيرية مختلفة:
- بكتيريا كروية موجبة لصبغة جرام عنقودية Staphylococcus.
- بكتيريا عصوية موجبة لصبغة جرام Bacillus.

خطوات العمل:

1- نظف الشرائح التى تستعملها جيداً بمحلول منظف، ثم جففها. أمسك الشريحة النظيفة من نهايتها أو من حوافها ثم أرسم عليها من الخلف دائرة بقلم يكتب على الزجاج وأعطى لكل شريحة رقم خاص بها.

2- ضع نقطة من الماء المقطر وسط الدائرة بواسطة إبرة التلقيح ذات العقدة.

3- عقم إبرة التلقيح بوضعها فى لهب بنزن لتسخن حتى درجة الأحمرار، أترك الأبرة لتبرد حتى لا تقتل الخلايا البكتيرية عند إستعمالها.

4- خذ بالعقدة التى فى نهاية الأبرة مسحة من المزرعة البكتيرية النامية على أنابيب الأجار أو من المستعمرات النامية على أطباق الأجار المغذى.

5- أخلط الخلايا البكتيرية المحمولة على العقدة الأبرة مع نقطة الماء ليتكون معلق، أنشر المعلق البكتيري على الشريحة.
إذا كانت المزرعة البكتيرية نامية في وسط غذائي ىسائل خذ بعقدة الأبرة قطرة من المزرعة وضعها مباشرة على الشريحة بدون نقطة ماء ثم أنشرها .

6- عقم أبرة التلقيح فى كل مرة تأخذ بها العينة وبعد الإنتهاء من عمل الغشاء ضع الأبرة المعقمة مكانها فى الحامل الموجود أمامك.

7- أترك الغشاء البكتيرى ليجف فى الهواء.

8- أمسك الشريحة من طرفها بواسطة مشبك غسيل وعرضها للهب الهادىء عدة مرات بسرعة حتى تجف تماما مع مراعاة عدم تسخين الغشاء تسخين يتلف الخلايا البكتيرية.

9- ضع الشريحة على حامل الصبغ ثم ضع على الغشاء الجاف والمثبت محلول أزرق الميثيلين لمدة دقيقة واحدة.

10- باحتراس أغسل محلول الصبغة الزائدة بالماء المقطر الموجود فى زجاجة الغسيل مع ملاحظة جعل الشريحة فى وضع مائل أثناء الغسيل.

11- جفف برفق الغشاء المصبوغ بإستعمال ورق الترشيح وذلك بضغط الشريحة بإحتراس بين ورقتى ترشيح.

12- افحص الغشاء المصبوغ بإستعمال العدسة الزيتية متبعاً الأرشادات التى تعلمتها فى الدروس العملية الأولى والثانية.
سجل ملاحظاتك أثناء فحص.

13- نظف العدسة الزيتية وكذلك الميكروسكوب بعد الإستعمال وأعده الى مكانه المخصص.