التعداد الحي للجراثيم.. النشر أو الصب في الطبق. عدم استعمال المسحات القطنية لأنها تمتص قسم من العالق الجرثومي

التعداد الحي

Viable count

من المعروف أن خلية جرثومية واحدة تؤدي إلى تكوين مستعمرة مرئية وعليه فإن عدد المستعمرات النامية على وسط الأكار تماثل العدد الأصلي للجراثيم.

يمكن عد الجراثيم الحية بالطرق التالية:
عد المستعمرات في الطبق وتجري هذه بطريقتين:
أ‌- النشر في الطبق spreading plate method
ب‌- الصب في الطبق Pour plate method

تتم كلا الطريقتين عادة بإجراء تخافيف عشارية او مضاعفة من العينة في أنابيب اختبار تحتوي على سائل زرعي معقم او سائل ملحي معقم ثم تؤخذ عينات بمقدار 0.1 مل وتزرع باحدى الطريقتين، حيث يتم زرع ثلاثة أطباق من كل تخفيف (التخفيف الافضل).


أ‌- طريقة النشر في الطبق:

1- توضع كمية 0.1 من المحلول المخفف الذي يحتوي على الجراثيم فوق الوسط.

2- ثم تنشر بواسطة الناشرة الزجاجية glass spreader (لا تستعمل المسحات القطنية لأنها تمتص قسم من العالق الجرثومي).

3- يترك الوسط لمدة 5 دقائق لكي يتم امتصاص العالق.

4- توضع الاطباق في الحاضنة بدرجة 37 °م لمدة 16 – 24 ساعة.

5- يتم بعدها عد جميع المستعمرات النامية في الطبق ومن ثم يحسب عدد الجراثيم كما يلي:

العدد الجرثومي في العينة الاصلية = العدد الكلي للمستعمرات في الطبق x 10 x مقلوب التخفيف.

ب‌- طريقة الصب في الطبق:

1- يتم أولاً تخفيف العينة المراد معرفة التعداد الجرثومي لها.

2- توضع النقلة الجرثومية (0.1) مل من العالق الجرثومي في طبق بتري.

3- يضاف اليه Nutrient agar المنصهر في درجة 45 °م ويتم تحريك الطبق حركة دائرية عدة مرات باتجاه عقرب الساعة وعكس اتجاه عقرب الساعة لتجانس التوزيع.

4- يترك الاكار ليتصلب ثم توضع الاطباق في الحاضنة بدرجة 37 °م ولمدة تتراوح بين 16- 24 ساعة.

5- يتم بعدها عد جميع المستعمرات النامية في الطبق ومن ثم يحسب عدد الجراثيم كما يلي:
العدد الجرثومي في العينة الاصلية = العدد الكلي للمستعمرات في الطبق x 10 x مقلوب التخفيف.