التعداد الحي: نافذة على عالم الميكروبات الحية، وكيف يساعدنا في فهم التنوع الميكروبي وتطوير استراتيجيات جديدة لمكافحة الأمراض

مفهوم التعداد الحي:

يعتبر التعداد الحي Viable Count أحد أهم الطرق المستخدمة في علم الأحياء الدقيقة لتقدير عدد الخلايا الجرثومية الحية القادرة على النمو والتكاثر في وسط غذائي مناسب. هذه الطريقة تعتمد على مبدأ أساسي هو أن كل خلية جرثومية حية قادرة على النمو لتشكل مستعمرة مرئية على سطح وسط الأجار. وبالتالي، فإن عد هذه المستعمرات يعطينا تقديراً لعدد الخلايا الحية الموجودة في العينة الأصلية.

طرق التعداد الحي:

توجد طريقتان رئيسيتان للتعداد الحي:

1. طريقة النشر على السطح (Spread Plate Method):

في هذه الطريقة، يتم نشر كمية محددة من العينة المخففة على سطح وسط الأجار الصلب الجاهز. تتوزع الخلايا الجرثومية على سطح الوسط وتبدأ في النمو لتشكل مستعمرات منفصلة.

خطوات الطريقة:

• التخفيف: يتم تخفيف العينة بشكل متسلسل للحصول على تركيزات بكتيرية مناسبة لعد المستعمرات.
• النشر: يتم نشر حجم محدد من التخفيف على سطح وسط الأجار باستخدام موزع زجاجي.
• الحضانة: توضع الأطباق في حاضنة مناسبة لدرجة الحرارة والوقت اللازم لنمو المستعمرات.
• العد: بعد الانتهاء من الحضانة، يتم عد المستعمرات المرئية على سطح الوسط.

2. طريقة الصب في الطبق (Pour Plate Method):

في هذه الطريقة، يتم خلط العينة المخففة مع وسط الأجار السائل الدافئ ثم صب الخليط في أطباق بتري. تتوزع الخلايا الجرثومية داخل وسط الأجار وتبدأ في النمو لتشكل مستعمرات.

خطوات الطريقة:

• التخفيف: يتم تخفيف العينة كما في الطريقة السابقة.
• الصب: يتم إضافة حجم محدد من التخفيف إلى وسط الأجار الدافئ في طبق بتري.
• التصلب والحضانة: يترك الوسط ليتصلب ثم توضع الأطباق في الحاضنة.
• العد: يتم عد المستعمرات المرئية بعد الحضانة.

حساب عدد الجراثيم:

بعد عد المستعمرات في الأطباق، يتم حساب عدد الجراثيم في العينة الأصلية باستخدام المعادلة التالية:

• عدد الجراثيم في العينة الأصلية = العدد الكلي للمستعمرات في الطبق × عامل التخفيف

عامل التخفيف: هو العدد الذي يمثل التخفيف الإجمالي للعينة. مثلاً، إذا تم تخفيف العينة 10 مرات، فإن عامل التخفيف هو 10.

عوامل تؤثر على دقة التعداد:

• التخفيف: يجب اختيار التخفيف المناسب للحصول على عدد مناسب من المستعمرات (عادة بين 30 و 300 مستعمرة).
• وسط الزراعة: يجب اختيار وسط زراعة مناسب لنوع الجراثيم المراد عدها.
• ظروف الحضانة: درجة الحرارة ومدة الحضانة تؤثران على نمو الجراثيم.
• تقنية النشر أو الصب: يجب أن تتم هذه العمليات بشكل صحيح لتجنب تكوين مستعمرات متلاصقة.

أهمية التعداد الحي:

• تقييم جودة المنتجات: مثل الأغذية والمياه.
• متابعة نمو الثقافات البكتيرية في المختبر.
• تقييم فعالية المطهرات والمضادات الحيوية.
• دراسة التنوع الميكروبي في البيئات المختلفة.

خاتمة:

يعد التعداد الحي أداة أساسية في علم الأحياء الدقيقة. من خلال فهم هذه الطريقة وتطبيقها بشكل صحيح، يمكننا الحصول على تقديرات دقيقة لعدد الخلايا الجرثومية الحية في مختلف العينات.