خطوات وطريقة عملية التصبيغ:
تعتبر عملية التصبيغ إحدى الخطوات الأساسية في تحضير العينات البكتيرية للفحص المجهري. تهدف هذه العملية إلى تثبيت الخلايا البكتيرية على الشريحة الزجاجية وتلوينها بصبغات خاصة لزيادة التباين بين الخلايا والوسط المحيط بها، مما يسهل رؤيتها ودراستها تحت المجهر.
وتتمثل خطوات عملية التصبيغ في:
التحضير الأولي للشريحة:
- تنظيف الشريحة: يتم تنظيف الشريحة الزجاجية جيداً لإزالة أي أوساخ أو زيوت قد تؤثر على التصاق الخلايا. يمكن غسل الشريحة بالماء والصابون ثم شطفها بالماء المقطر وتجفيفها.
- تثبيت الشريحة: يمكن تثبيت الشريحة على حامل الشرائح باستخدام مشبك أو مادة لاصقة مناسبة.
إعداد مسحة رقيقة من العينة:
- نقل العينة: باستخدام حلقة ناقلة معقمة، يتم نقل كمية صغيرة من العينة البكتيرية (سائلة أو صلبة) إلى سطح الشريحة الزجاجية.
- توزيع العينة: يتم توزيع العينة على الشريحة لتكوين طبقة رقيقة ومتجانسة. يجب تجنب طبقات سميكة لأنها قد تمنع وصول الصبغة إلى جميع الخلايا.
تجفيف وتثبيت المسحة:
- التجفيف: يتم ترك الشريحة تجف في الهواء الطلق أو باستخدام مجفف شرائح.
- التثبيت: بعد الجفاف، يتم تثبيت الخلايا على الشريحة عن طريق تمرير الشريحة فوق اللهب ثلاث مرات وبسرعة. هذه العملية تعمل على قتل الخلايا وتثبيتها على الشريحة.
الصبغ:
- اختيار الصبغة: يتم اختيار نوع الصبغة المناسب حسب الهدف من التصبيغ. بعض الصبغات تستخدم لتلوين جميع الخلايا (صبغات بسيطة)، بينما تستخدم صبغات أخرى للتمييز بين أنواع مختلفة من البكتيريا (مثل صبغة جرام).
- تطبيق الصبغة: يتم تغطية المسحة بالصبغة المختارة وتركها لمدة زمنية محددة حسب نوع الصبغة.
- الشطف: بعد ذلك، يتم شطف الشريحة بالماء المقطر لإزالة الزائدة من الصبغة.
التجفيف والفحص:
- التجفيف: يتم تجفيف الشريحة مرة أخرى قبل الفحص.
- الفحص المجهري: يتم فحص الشريحة تحت المجهر الضوئي باستخدام عدسة زيتية للحصول على أكبر قدر من التكبير والوضوح.
أهمية كل خطوة:
- التنظيف والتثبيت: يضمنان الحصول على شريحة نظيفة وخالية من الشوائب، وتثبيت الخلايا بشكل جيد على الشريحة.
- إعداد مسحة رقيقة: يسهل اختراق الصبغة إلى جميع الخلايا ويوفر صورة واضحة تحت المجهر.
- التجفيف والتثبيت بالحرارة: يقتل الخلايا ويمنعها من الانتشار، ويضمن التصاقها بالشريحة.
- الصبغ: يزيد التباين بين الخلايا والوسط المحيط بها، مما يسهل رؤيتها ودراستها.
أنواع الصبغات واستخداماتها:
توجد العديد من أنواع الصبغات المستخدمة في علم الأحياء الدقيقة، ولكل منها استخدامات خاصة. من أشهر هذه الصبغات:
- صبغة جرام: تستخدم للتمييز بين البكتيريا موجبة الجرام وسالبة الجرام.
- صبغة الميثيلين الزرقاء: تستخدم كصبغة بسيطة لتلوين جميع أنواع البكتيريا.
- صبغة السفرانين: تستخدم كمصبغة مضادة في صبغة جرام.
ملاحظات هامة:
- يجب التعامل مع العينات البكتيرية بحذر واتباع إجراءات السلامة المختبرية.
- يجب اختيار نوع الصبغة المناسب حسب نوع العينة والهدف من التصبيغ.
- يجب ضبط تركيز الصبغة ووقت التلوين بدقة للحصول على أفضل النتائج.
التسميات
سلامة