طريقة حساب عدد الصفيحات.. أوكسالات الأمونيوم تحلل الكريات الحمراء

تستخدم الأعداد اليدوية بشكل روتيني في مختبرات تعاني من قلة الموارد، ومع ذلك فما زالت هناك حاجة إليها في المختبرات المزودة بأحدث الأجهزة بالنسبة لعينات الدم التي تحتوي على نسبة كبيرة من الصفيحات العملاقة.

ومع ذلك، فبالنسبة لجميع العينات الأخرى، تعرض عدادات الدم الآلية بالكامل أعداد الصفيحات بدقة أكبر بكثير عن تلك الأعداد التي تعرضها الطريقة اليدوية لأعداد الصفيحات.

القاعدة:

يتم إجراء عمليات العد للصفيحات اليدوية عن طريق الفحص البصري للعينات المخففة والدم المتحلل بالكامل باستخدام حجيرة عد نويباور أو حجيرة عد نويباور المحسنة لإجمالي أعداد كريات الدم البيضاء.

الأهمية السريرية:

يتم إجراء هذا الاختبار للكشف عن كثرة الصفيحات أو قلة الصفيحات التي تحدث في العديد من الأمراض.

العينات:

يتم احتساب أعداد الصفيحات بشكل أفضل على عينة دم غير متخثر باستخدام حمض الخليك الرباعي ثنائي أمين الإيثيلين (EDTA) والذي تم الحصول عليه بواسطة بزل وريد نظيف.

كما يمكن تنفيذها على عينات الدم التي تم الحصول عليها بواسطة وخز الجلد، بيد أن النتائج لا تكون مرضية بنفس الدرجة في عينات الدم الوريدي.

أعداد الصفيحات في عينات وخز الجلد تكون أقل بكثير منها في عينات الدم الوريدي وأقل ثباتًا؛ حيث أنه من المحتمل فقد عدد متغير من الصفيحات في موضع ثقب الجلد.

الأواني الزجاجية والمعدات:

حجيرات العد:

إن مسألة وضوح القواعد في حجيرة العد لا تقل أهمية عن دقة المعايرة، ولذلك يوصى بأن يكون سطح الحجيرات معالج بالمعادن وأن تحتوي الحجيرات على قواعد نويباور أو قواعد نويباور المحسنة.

وتضم تلك الحجيرات تسعة مناطق مخططة مقاس 1 ملم × 1 ملم والتي، عندما تغطى بشكل صحيح باستخدام غطاء سميك من الزجاج الخاص، فإن كل واحدة منها تحتوي على واسطة تخزين مقاس 0.1 ميكرولتر من الدم المخفف.

يتعين عدم استخدام السواتر الزجاجية المصممة لتثبيت التحضيرات المجهرية مع حجيرات العد.

يتم عرض العينة بين الحجيرة والساترة الزجاجية باستخدام أنبوب شعري أو ممص، ويتم عرض التحضير باستخدام عدسة مجهر 10 بوصة وعينية عدسة المجهر مقاس 6 أو 10 بوصة.

وباستخدام حجيرات نويباور أو حجيرت نويباور المحسنة، يمكنك عد الكريات في 4 أو 8 مستطيلات أفقية مقاس 1 ملم × 0.05 ملم (80 أو 160 مربع صغير) أو في 5 أو 10 مجموعات تتكون من 16 مربع بما في ذلك الكريات التي تلامس الحافة السفلى والحافة اليسرى من المربعات الصغيرة.

الكواشف:

1% أوكسالات الأمونيوم التي تحلل الكريات الحمراء، حيث يقدم المخفف عدد أعلى وأكثر دقة بالنظر إلى استخدام السيترات المنهجية والتي تترك الكريات الحمراء سليمة.

الإجراءات:

يتكون المخفف من من 1% أوكسالات أمونيوم مائية تتحلل داخلها الكريات الحمراء.

ينصح بهذا الإجراء بدلاً من أن استخدام السيترات المنهجية كمخفف، والتي تترك الكريات الحمراء سليمة، ومن المرجح أنها تعطي نتائج غير صحيحة وذلك عندما يكون عدد الصفيحات منخفض.

قبل تحليل عينة الدم، افحصها جيدًا للتحقق من وجود جلطات دموية.

وفي حالة وجودها، ينبغي طلب عينة حديثة نظرًا لأن الجلطات ستتسبب في انخفاض عدد الصفيحات على نحو غير حقيقي.

قم بعمل تخفيف للدم المخلوط جيدًا بمعدل 1 في 20 في المخفف عن طريق إضافة 0.1 ملي لتر من الدم إلى 1.9 ملي لتر من مخفف أوكسالات الأمونيوم (10 جم/لتر).

ينبغي أن لا تزيد نسبة المخفف عن 500 ملي لتر في المرة الواحدة، مع استخدام الأواني الزجاجية النظيفة والماء الطازج منزوع الآيونات أو المقطر من الزجاج بعناية.

وإذا كان ذلك ممكناً، ينبغي تصفية المحلول من خلال مرشح يضم مسم مكروي (0.22 ميكرو متر) والاحتفاظ به عند درجة حرارة 4 مئوية.

وللاستخدام، يتم ترشيح جزء صغير من المخزون وتوزيعه على أحجام مقاس 1.9 ملي لتر في أنابيب مقاس 75 × 12 ملم.

اخلط التعليق في خلاطة ميكانيكية لمدة تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة. املء حجيرات لعد نويباور بالتعليق باستخدام أنبوب زجاجي شعري متين أو أنبوب باستور.

ضع حجيرة العد في طبق بتري رطب واتركه لمدة 20 دقيقة على الأقل لإعطاء الصفيحات وقتًا لتستقر.

افحص المستحضر باستخدام عدسة مجهر مقاس 40 بوصة وعينية عدسة مجهر مقاس 6 أو 10 بوصة.

تظهر الصفيحات أسفل الإضاءة الاعتيادية كجسيمات صغيرة (ولكنها ليست دقيقة) سهلة الانكسار إلى حد كبير إذا تم عرضها مع حمل المكثف لأسفل؛ حيث أنه عادة ما يتم توزيعها بشكل جيد ونادرًا ما تتواجد جراثيم مكدسة إذا تم سحب عينة الدم بإتقان.

لتجنب إدخال جسيمات قذرة إلى الحجيرة، والتي قد تشكل خطأ بالنسبة للصفيحات، يجب أن تكون جميع المعدات نظيفة تمامًا.

وباستخدام المجهر الطوري، من الممكن مشاهدة الصفيحات بسهولة أكبر.

تعتبر حجيرة العد الخاصة، رقيقة القاع، مقاس (1 ميكرو متر)، هي الخيار الأفضل لتأثير طوري أمثل. وينبغي عد عدد الصفيحات الموجودة في مساحة واحدة أو أكثر مقاس 1 ملم مربع.

كما ينبغي أن يتجاوز العدد الإجمالي للصفيحات التي يتم عدها 200 في جميع الحالات لضمان معامل اختلاف يتراوح من 8 إلى 10%.

العوامل التي تؤثر على الاختبار:

الأخطاء المتعلقة بالعد اليدوي للكريات عبارة عن أخطاء فنية ومتأصلة.

ومن الممكن الحد من الأخطاء الفنية عن طريق تجنب الوقوع في الأمور التالية: 

- استخدام أسلوب ضعيف في الحصول على عينة الدم.

- خلط غير كافي لعينة الدم.

- ممص غيردقيق واستخدام ممصات أو حجيرات عد تمت معايرتها بشكل سيء.

- خلط غير كاف لتعليق الكريات.

- ملء غير صحيح لحجيرات العد.

- الإهمال في عد الكريات الموجودة داخل الحجيرة.