اختبار تراص فيدال لتشخيص الحمى المعوية

اختبار تراص فيدال لتشخيص الحمى المعوية، يختبر مصل المرضى مباشرة للتأكد من وجود أجسام مضادة إما بطريقة الشريحة أو طريقة الأنبوب، هذه الاختبارات إما وصفية أو شبه كمية.

اختبار الشريحة السريع يستخدم في الأساس كإجراء فحص ويكون مفيدا خاصة عندما يلزم فحص عدد كبير من الأمصال.

يستخدم اختبار الأنبوب لتأكيد النتيجة الإيجابية التي حصل عليها من اختبار الشريحة.

تعتمد الدرجة التي يحدث بها التراص على تركيز المستضد وعدد الأجسام المضادة الموجودة وتركيب محلول الملح ودرجة الحرارة.

قد تظهر الأمصال المأخوذة من المرضى العاديين تراصًا إيجابيًا من خلال مستضد فيدال بسبب التمنيع السابق والإصابة الماضية أو بسبب وجود أجسام مضادة مرتبطة بالمستضد أو العيار المكتشف كنتيجة للإصابة النشطة أو التمنيع الحديث.

لذا، يلزم تقييم عينتين أو أكثر يؤخذان بعد فترات زمنية تتراوح من 3 إلى 5 أيام من بداية المرض، تعتبر الزيادة التصاعدية دليلا أساسيا على الإصابة الحديثة أو التمنيع الحديث.

عوامل حديدية:

1- المستضدات: المستضد عبارة عن خلايا بكتيرية متعذرة الحياة (سلمونيلة) في 0.5% من الملح المشبع بالفينول والصبغة.

2- ممصات سيرولوجية، 0.2 ملليلتر مع تدرج 0.1 ملليلتر. سعة 0.1 ملليلتر.

3- شريحة تراص الفئة بقوس.

4- قضبان مطباق خشبية.

5- ملح فيزيولوجي (0.85% كلوريد الصوديوم).

6- هزاز تدويري (إن أمكن).

 

الإجراء: 

- جمع العينات:

اجمع من 5 إلى 10 ملليلتر من الدم في أنبوب عادي صغير دون مادة مضادة لتخثر الدم.

اترك الدم حتى يتخثر لمدة تتراوح من 20 إلى 30 دقيقة، يمكن حفظ المصل لفترة تصل إلى 24 ساعة في درجة حرارة 2.8 مئوية.

إذا تطلب الأمر الحفظ لفترات أطول، يتعين التجميد، لا تقم بإعادة تجميد الدم الذي أذاب المصل

يتعين ترك المستضد حتى يدفأ في درجة حرارة الغرفة قبل استخدامه في الاختبار.

أ- طريقة الشريحة:

1- وفر 0.08 و0.04 و0.02 و0.01 و0.005 ملليلتر من مصل الاختبار في حلقة منفصلة، باستخدام ممص 0.2 ملليلتر.

2- قم بهز قارورة المستضد لخلط المحتويات تمامًا.

3- أضف قطرة واحدة من المستضد على كل دائرة، اخلط المستضد والمصل، باستخدام خلالة أسنان أو مطباق لكل دائرة.

4- قم بهز الشريحة لمدة تتراوح من 1 إلى 3 دقيقة (إجراء قفل الأدوات) أو باستخدام هزاز تدويري إن توفر. 

5- التخفيف الذي يعطي قيمة تراص 2 أو أكثر هو نقطة النهاية أو العيار لهذا المصل.

ملاحظة:

أدوات تخزين: طاقم فيدال، يخزن عند درجة حرارة تتراوح من 2 إلى 8 مئوية، المستضد جاهز للاستخدام حسب تجهيزه.

عيار القياس:

العيار عبارة عن تبادل أقصى إجراءات التخفيف البالغة تراص بقيمة 2 أو أكثر

جدول تسجيل التراص:

درجة التراص:

- 100% - الخلفية واضحة تميل إلى الضبابية قليلا / 4+

- 75% - الخلفية واضحة تميل إلى العتمة قليلا / 3+

- 50% - الخلفية متوسطة العتمة / 2+

- 25%- الخلفية معتمة / 1+

- لا- سلبية

جدول تحديد عيار الجسم المضاد:

العيار هو أقصى درجات التراص التي تتسبب في حدوث تراص بقيمة (2) أو أكثر:

المصل بالملليلتر	التخفيف المرتبط
0.08	1:20
0.04	1:40
0.02	1:80
0.01	1:160
0.005	1:320

جدول يعرض في الجدول التالي مثال على اختبار الشريحة:

نتائج اختبار الشريحة:

نتيجة اختبار الشريحة
تحضير مصل، بالملليلتر التخفيف	0.08	0.04	0.02	0.01	0.005	عيارات المصل أو نقطة النهاية الخاصة به
	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320

 

تفاعل التراص
المصل رقم 1	++++	++++	++++	++	-	1:160
المصل رقم 2	++++	+++	++	-	-	1:80
المصل رقم 3	+++	++	++	_	_	1:80

ملاحظة:

1- إن اشتبه في وجود تراص تلقائي للمستضد (يتضح من خلال مجهر منخفض القوة)، تكون القارورة غير مستقرة ويتعين طرحها.

2- يفشل المرضى من حين لآخر في تكوين راصات للمصل.

يعطي المخطط الموجود أدناه مؤشرًا تقريبيًا على أهمية عيارات المصل.

جدول مؤشر عيارات المصل المهمة:

راصات المصل
المرض	راص حمي - راص فيدال	الظهور	الحد الأقصى	العيار والأهمية
حمى تيفود	سلمونيلة O فصيلة D	من 7 إلى 10 أيام	من 3 إلى 5 أسابيع	1:80 (في مرحلة مبكرة) = اشتباه 1:160 فما فوق = اشتباه قوي
الإصابة بشبيه سلمونيلة حمى التيفود	سلمونيلة O فصيلة A سلمونيلة O فصيلة B			هؤلاء الذين يعانون من استمرار الحمى والتيفود لفترات طويلة مثل أعراض الأجسام المضادة الموجودة الخاصة بالعيارات المشابهة لما ذكر أعلاه

ملاحظة:

1- الحد الأدنى من العيارات، المعرف كقيمة إيجابية لمستضد التيفود O والمستضد H ، يتعين تحديده للمناطق الجغرافية الفردية.

2- يحدث تفاعل متصالب مع كل من سلمونيلة الفصيلة d غير التيفية بالإضافة إلى السلمونيلة من فصائل أخرى.

3- عيار فردي مرتفع بالنسبة إلى (O) يساوي (1:320) أو أكثر أو بالنسبة إلى H  يساوي (1:640) أو أكثر يعتبر إيجابيًا.