البروتين الشحمي منخفض الكثافة هو بروتين شحمي يشارك في نقل الكوليستيرول إلى الخلايا.
عند حدوث زيادة في معدلات البروتين الشحمي منخفض الكثافة فقد يكون ذلك ناتج عن تغير النظام الغذائي والأمراض الوعائية.
كما يحدث انخفاض في حالات متلازمة العوز مناعي المكتسب والأورام الدموية الخبيثة مثل الابيضاض النخاعي الحاد أو الابيضاض النخاعي المزمن والاضطرابات المصاحبة لتضخم الطحال.
يعتمد التحليل على الفحص الإنزيمي المتجانس من أجل التحديد الكمي لكوليستيرول الدهون منخفضة الكثافة ويتكون من خطوتين.
يتضمن التحليل إزالة الكيلومكرونات والبروتين الشحمي وضيع الكثافة والبروتين الشحمي عالي الكثافة يتبعها تعيين للبروتين الشحمي منخفض الكثافة في العينة.
يتم مزج 10 ميكروجرام من عينة المريض وتحضينها عند درجة حرارة 37 درجة مئوية مع 750 ميكروجرام من محلول إنزيمي يحتوي على إستراز الكوليستيرول وأكسيداز الكوليستيرول والذي يسمح بإزالة الكيلومكرونات والبروتين الشحمي وضيع الكثافة والبروتين الشحمي عالي الكثافة من العينة عن طريق تكوين الكوليستينون وبيروكسيد الهيدروجين.
يتم تحويل البروتين الشحمي الموجود في العينة إلى كوليستينون وبيروكسيد الهيدروجين في ظل وجود إستراز الكوليستيرول وأكسيداز الكوليستيرول وفاعل بالسطح محدد. يتحول مولد اللون في وجود بيروكسيد الهيدروجين إلى صبغ ملون (كينين) والذي يتم قياس تركيزه بطريقة قياس الألوان.
العينة:
1- يوصى بأخذ عينة مقدارها 10 ميكرولتر من مصل الدم أو البلازما.
قم بجمع العينات بواسطة تقنية بزل الوريد القياسية.
قد يستخدم الهيبارين كمضاد للتخثر لعينات البلازما.
قم بحفظ العينات في حاويات مغلقة لتجنب حدوث تلوث وتبخر.
اتبع الاحتياطات العالمية عند القيام بالفصد أو التعامل مع عينات المريض أو ما يتم معايرته أو أي منتجات أخرى أساسها هو مصل الدم.
تخلص من المواد الملوثة بالنفايات المسببة للعدوى.
2- إذا كان تركيز مصل الدم الخاص بالبروتين الشحمي منخفض الكثافة يفوق مجال القياس قم بتخفيف العينة قبل الترسيب بنسبة 1:1 بواسطة محلول ملحي نظامي وأعد الاختبار وأضرب النتائج في 2 للحصول على التركيز الأصلي للبروتين الشحمي منخفض الكثافة.
3- يبقى الكوليستيرول مستقرًا في مصل الدم لمدة 6 أيام عند درجة حرارة تتراوح من 4 إلى 25 درجة مئوية ولمدة 4 أشهر عند 20 درجة مئوية.
4- يجب فصل مصل الدم من تجلط الدم بأسرع ما يمكن.
الكواشف والمواد:
1- مقياس الضوء.
2- أنبوب من الجل (مادة تسريع التجلط).
3- منبذة.
4- الكاشف (إنزيمات):
- محلول منظم جود (7 pH) ---- 50 ملمول/ لتر
- إستراز الكوليستيرول ---- 600 وحدة لتر
- إستراز الكوليستيرول ---- 500 وحدة/ لتر.
- كاتالاز ---- 600 كيلو وحدة/ لتر.
- TOOS ---- 2 ملمول/ لتر.
- منظفات ---- 0.3% وزن/ للحجم.
- الحوافظ ---- <0.1% وزن/ للحجم.
- ركيزة البيروكسيداز ---- 4000 وحدة/ لتر.
- 4-أمينو أنتيبيرين ---- 4 ملمول/ لتر.
- محلول منظم جود (7 pH) ---- 50 ملمول/ لتر.
- آزيد الصوديوم ---- 0.05%.
- منظفات ---- 1% وزن/ للحجم.
- الحوافظ ---- <0.1% وزن/ للحجم.
المعايرة:
1- تفريغ وغسيل الكوفيت المتدفق من خلال الضغط على [WASH] الموجود على شاشة LCD.
سوف يحدث رجوع تلقائي لقائمة التحديد.
2- ادفع كمية صغيرة من خلال الضغط على الرافعة [P] لتفريغ نظام الأنبوب.
لا تقم بسكب أي محلول.
3- قم بقياس 1000 ميكرولتر على وجه التحديد من الماء المقطر في كوب عينة ثم اسكب الماء المقطر بدفع رافعة السكب "P".
سوف يتم تلقائيًا قياس 1000 ميكرولتر من حجم الكمية المسكوبة في الكوفيت المتدفق.
سوف يتم عرض مدة الانتقال الخاصة بالهواء والماء على الشاشة.
4- اضغط [↵] لإنهاء عملية المعايرة.
سوف يعود البرنامج إلى قائمة التحديد.
مراقبة الجودة:
1- عند بداية كل نوبة عمل قم بتفعيل مواد مراقبة الجودة على المجالات الطبيعية وغير الطبيعية (ضوابط رقابية عالية ومتدنية).
اعمل دائمًا على تفعيل مجموعة من الضوابط الرقابية بعد معايرة جهاز التحليل.
إذا كانت الضوابط خارجة عن النطاق فلا تقم بتقديم نتائج المريض إلا بعد حل المشكلة حيث يتم إعادة تحليل عينات المريض باستخدام عينات مراقبة الجودة في إطار نطاق مقبول.
2- يتم التعبير عن التغير في صورة الانحراف المعياري ومعامل التغيير ويتم توضيحه من خلال مخطط بياني لتقييم الجودة يسمى Levy-Jennings graph.
الإجراء:
1- قم بتصنيف أنبوبين وماصتين وضع 10 ميكروجرام من الماء و750 ميكروجرام من محلول الإنزيم في الأنبوب 1 (خاوي) وفي ماصة الأنبوب 2 10 ميكروجرام من عينة الاختبار و750 ميكروجرام من محلول الإنزيم.
امزج بلطف ثم قم بإجراء التحضين عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
2- أضف في كل أنبوب 250 ميكروجرام من المحلول كاشف اللون ثم امزجهم جيدا وقم بإجراء التحضين لمدة 5 دقائق في درجة حرارة 37 درجة مئوية ثم قم بقياس امتصاص العينة مقابل الكاشف الخاوي.
3- عندما يتم عرض MEASURE BLANK على الشاشة اضغط ZERO ثم أضف كمية صغيرة من خلال الضغط على الرافعة [P] لسكب الماء وتفريغ النظام.
4- عندما يتم عرض MEASURE RB على الشاشة قم بوضع الكوفيت الذي به محلول خاوي في حامل الكوفيت ثم قم بشفط المحلول الخاوي بدفع الرافعة [P].
5- عندما يتم عرض MEASURE SAMPLE على الشاشة قم بتثبيت الكوفيت المحتوي على محلول العينة في حامل الكوفيت ثم قم بشفط محلول العينة بدفع الرافعة [P].
6- اضغط على [RESULT] وترقب لمهلة محتملة بينما يتم قياس محلول العينة.
سوف يتم عرض النتيجة على السطر الأعلى.
7- قم بطبع النتائج أو تدوينها. اضغط على [WASH] لسكب محلول الشطف أو اضغط [MEASURE] لقياس العينة التالية بواسطة دفع رافعة السكب [P].
طرق الحساب:
يتم تقديم النتائج بوحدة ملمول/لتر. واستخدام طريقة حساب أخرى هو أمر غير ضروري إلا إذا تم تخفيف العينة.
النتائج:
1- القيم المتوقعة: 0-0.9 ملمول/لتر.
2- يجب على كل مختبر أن يؤكد تلك القيم.
ملاحظة:
متى تتجاوز قيم ثلاثي الجليسريد 400 ملجم/ديسيلتر فإن ذلك يتطلب استخدام القياس المباشر بدلاً من طريقة فريدوالد أو الطريقة "الحسابية".
يتم إجراء طريقة فريدوالد أو الطريقة "الحسابية" لتعيين البروتين الشحمي منخفض الكثافة من خلال طرح البروتين الشحمي رفيع الكثافة والبروتين الشحمي وضيع الكثافة من التركيز الكلي للكوليستيرول.
الكوليستيرول الكلي = البروتين الشحمي عالي الكثافة + البروتين الشحمي منخفض الكثافة + البروتين الشحمي وضيع الكثافة.
ويتم تقدير البروتين الشحمي وضيع الكثافة بصفة عامة بواسطة تركيز ثلاثي الجليسريد مقسومًا على 3 وذلك عندما تتجاوز قيم ثلاثي الجليسريد 400 ملجم/ديسيلتر.
القيود:
1- عندما يتداخل مستوى عالي من ثلاثي الجليسريد مع مقياس البروتين الشحمي منخفض الكثافة خفف العينة قبل الترسيب بنسبة 1:1 بمحلول ملحي بنسبة 0.9% ثم اضرب النتائج في 2.
2- سوف تعطي تركيزات حامض الأسكوربيك العالية (> 2.5 ملجم/ ديسيلتر) نتائج متدنية.
3- تتداخل معدلات الهيموغلوبين التي هي أعلى من 100 ملجم/ ديسيلتر ومعدلات البيليروبين التي هى أعلى من 10 ملجم/ديسيلتر مع الاختبار.
التسميات
معايير مختبرية