أغار الشوكولاتة مع ملحق النمو عبارة عن مستنبت يدعم متطلبات نمو خاصة مطلوبة لاستفراد الكائنات الحية الدقيقة (عند التحضين في غلاف جوي من ثاني أكسيد الكربون بمعدل 5%).
يحتوي أغار الشوكولاتة على تركيز مخفض من الأغار، مما يزيد من محتوى الرطوبة في المستنبت.
ينبغي أن يدعم أغار الشوكولاتة نمو المستديمة النزلية.
يمكن إعداد ممالات أغار الشوكولاتة للنقل والتخزين قصير الأجل بنفس الطريقة الموضحة لأطباق الأغار، إلا أن يتم توزيع المستنبت في أنابيب 16 × 125 مم ذات سدادو لولبية وينبغي إمالتها قبل التجميد.
1- يستخدم TSA كمستنبت أساسي.
ويتم إعداد قوة مضاعفة (بمعنى آخر، 20 جرام في 250 مل من الماء المقطر).
ويجرى بعد ذلك التعقيم بالبخار ويتبعه التبريد إلى درجة حرارة 50 درجة مئوية ويستخدم مقياس الحرارة للتحقق من درجة حرارة البريد.
2- إعداد محلول من الهيموغلوبين بنسبة 2%(بمعنى آخر، 5 5 جرام في 250 مل من الماء المقطر).
ويخلط الهيموغلوبين في 5 إلى 6 مل من الماء المقطر لتكوين عجينة ناعمة.
وتستمر عملية الخلط حتى يتم إضافة جميع المياه. ويجرى بعد ذلك التعقيم بالبخار ويتبعه التبريد عند 50 درجة مئوية.
3- إضافة محلول الهيموغلوبين إلى TSA ذات قوة مضاعفة ويستمر الاحتفاظ به عند درجة حرارة 50 درجة مئوية.
4- البديل إلى الخطوات1-3: إذا كان محلول الهيموغلوبين ليس متوفرًا، فإن البديل هو إضافة 5% من دم الأغنام المعقم مزال الفبرين أو دم الأرنب أو دم خنزير غينيا أو دم حصان (بمعنى آخر، 5 مل من الدم لكل 100 مل من الأغار) إلى TSA كامل القوة ( بمعنى آخر، 20 جرام في 500 مل من الماء المقطر).
ينبغي عدم استخدام الدم البشري. بعد تعقيم المستنبت الأساسي بالبخار وتبريده إلى 50 درجة مئوية، يضاف الدم
5- ويوضع في حمام ماء ساخن لا تزيد درجة حرارته عن 80 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة أو حتى يصل إلى لو ن الشوكولاتة. وبعدئذٍ يبرد إلى درجة 50 درجة مئوية.
6- بعد إضافة محلول الهيموغلوبين أو الدم مزال الفبرين إلى المستنبت الأساسي وتبريد المستنبت إلى 50 درجة مئوية، يضاف ملحق النمو (على سبيل المثال، IsoVitaleX أوVitox) إلى تركيز نهائي بنسبة 1%.
تخلط المكونات بلطف على شكل دائري؛ لتجنب تكوين فقاعات. ويوزع من 15 إلى 20 مل في أطباق بتري 15 × 100 مم.
مراقبة الجودة:
ينبغي اختبار جميع مستنبتات أغار الشوكولاتة التي تم إعدادها أو شراؤها حديثًا لتحديد سعة المستنبت بغية دعم نمو البكتيريا لتكون مستفردة، ولا سيما المستديمة النزلية.
وإذا كان المستنبت لا يدعم نمو واحدة من البكتيريا أو جميع البكتيريا، فينبغي التخلص من المستنبت وإعداد دفعة جديدة من المستنبتات أو شراؤها.
ينبغي أن يظهر أغار الشوكولاتة بلون بني إلى أحمر قانٍ.
وينبغي أن تظهر النيسرية السحائية والمستديمة النزلية بلون مائل إلى الرمادي، تقريبًا غشاء شفاف على سطح مائل بدون إزالة لون المستنبت بعد 24 ساعة في الحضانة؛ ينبغي أن تظهر العقدية الرئوية على شكل مستعمرات بلون رمادي إلى أخضر رمادي مع إزالة لون المستنبت المتميز المائل إلى اللون الأخضر.
إذا لم تنمو المستديمة النزلية، فقد يتم فقدان ملحق النمو (IsoVitaleX أو ما يعادله) سهوًا.
التسميات
معايير مختبرية