تصبيغ وتحضير الكروموسومات باستخدام كريات الدم البيضاء

تصبيغ الكروموسومات:

لغرض الدراسة الدقيقة والتشخيص الدقيق للكروموسومات تطلب الامر إيجاد طرق حديثة لتصبيغ الكروموسومات بحيث تكون هذه الطرق سهلة عمليا من الناحية المختبرية والتي بواسطتها يمكن فحص الكروموسومات بصورة دقيقة تحت المجهر بحيث يمكن تميز بعضها عن البعض الآخر.

تحضير الكروموسومات:

هناك عدة طرق لتحضير الكر وموسومات وتعتمد جميعها تقريبا على نفس الأسس وأن استخدام كريات الدم البيضاء الأكثر شيوعا واستعمالا وأبسط الطرق من حيث التقنية المستعملة.

هنالك العديد من الطرق المحورة من قبل الباحثين والتي تعتمد أساسا على طريقة العالم مورهيد  Moorhead عام 1960.

وسوف نتطرق الى الطريقة الموصوفة من قبل العالمين بسرور Basrur وكيلمن Gilmann عام 1964.

طريقة العمل:

1- يوخذ 5 ملليتر من دم الكائن الحي بواسطة سرنجة حاوية على 0,8 مليلتر هيبارين.

2- يؤخذ  1ملليتر من عينة الدم المجموعة  وتضاف إلى 7,2 مليلتر من وسط غذائي خاص 199 10 x اضافة الى 1,8 مليلتر من مصل الدم.

3- يضاف الى الوسط 0,5 مليلتر من بيكاربونات الصوديوم  بتركيز 2,8%.

4- يضاف 0,5 phytoheamaglutinin.

5- يضاف 0,4 مليلتر من محلول ستربتومايسين اوالبنسلين كمضادات حيوية.

6- تحضن العينة لمدة 68-72 ساعة بدرجة حرارة 37-38 درجة مؤية.

7- ترج العينة مرتين كل 24 ساعة.

8- قبل انتهاء المدة بحوالي 4-6 ساعات تعامل العينة  بماد الكولشين colchicin بتركيز 0,01%.

9- تثبت الخلايا بعد فترة الحضانة يتم اخراج العينات من الحاضنة وتنقل الى انابيب اختبار خاصة حيث تتم عملية الطرد المركزي بسرعة 1000 دورة / دقيقة لمدة 5 دقائق.

10- يسكب الجزء العلوي ويعامل الراسب بحامض Kcl بتركيز 0,7% ولمدة 40 دقيقة.

11- تنبذ العينة مرة اخرى بنقس السرعة والمدة.

12- يسكب الراشح ويعامل الراسب بحامض الخليك 100% جزء: 3اجزاء كحول اثيلي 100%.

13- تنبذ العينة لثلاث مرات ولنفس المدة والسرعة.

14- ينقل الراسب القليل المتبقي على شرائح زجاجية ثم تتم عملية التجفيف في الهواء لمدة قد تصل الى 72 ساعة ثم تصبغ الكروموسومات.

15- تستخد طريقة أحزمة G للتصبيغ وذلك بمعاملة العينة باستخدام انزيم التربسين بتركيز 0,25% لمدة دقيقة أو دقيقتين.

16- تغسل الشرائح بالماء ثم تصبغ بصبغة كيمزا Giemsa لمدة 4-5 دقيقة.

17- تفحص الشرائح باستخدام العدسة الزيتية.